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人類(lèi)胚胎干細(xì)胞治療自閉癥:系列病例

背景:自閉癥譜系障礙是一種神經(jīng)發(fā)育障礙,伴有免疫系統(tǒng)薄弱和神經(jīng)炎癥。自閉癥譜系障礙的病因有多種,包括遺傳性疾病、環(huán)境物質(zhì)/毒素、免疫系統(tǒng)失衡、腦炎和病毒感染。自閉癥譜系障礙是一種不治之癥;然而,可以通過(guò)教育和醫(yī)療干預(yù)措施來(lái)管理。

人類(lèi)胚胎干細(xì)胞療法已被證明可以改善大腦的血液灌注;因此,這種療法可能有效提高自閉癥譜系障礙患者的運(yùn)動(dòng)技能、社交技能和認(rèn)知能力。

方法:三名患有自閉癥譜系障礙的兒科患者接受了人類(lèi)胚胎干細(xì)胞治療。他們的治療計(jì)劃包括3至4個(gè)療程(T1、T2、T3、T4),持續(xù)4至6周,每個(gè)療程之間間隔4至8個(gè)月的間隙期。

結(jié)果:患者的眼部協(xié)調(diào)能力、書(shū)寫(xiě)能力、平衡能力、認(rèn)知能力和言語(yǔ)能力得到改善,并且對(duì)噪音和氣味的過(guò)敏程度降低。

結(jié)論:使用人類(lèi)胚胎干細(xì)胞療法對(duì)于自閉癥譜系障礙患者可能是一種安全有效的治療方法。需要更大樣本量的研究來(lái)支持在該患者群體中使用人類(lèi)胚胎干細(xì)胞療法。

介紹

自閉癥譜系障礙 (ASD) 是一種神經(jīng)發(fā)育障礙,其特征是社交脫節(jié)、言語(yǔ)和非言語(yǔ)交流不完整、興趣嚴(yán)重受限以及表現(xiàn)出刻板和重復(fù)的強(qiáng)迫行為。

目前ASD的診斷是基于第五版精神障礙診斷和統(tǒng)計(jì)手冊(cè)(?DSM-5?) 中的修訂標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)DSM-5 ,ASD是一種單譜障礙,包括先前在DSM第四版中描述的三種障礙—自閉癥、阿斯伯格癥和廣泛性發(fā)育障礙,未另有說(shuō)明 (PDD-NOS)。科學(xué)證據(jù)和臨床實(shí)踐支持這一單一譜反映了當(dāng)前定義的癥狀學(xué)、時(shí)間進(jìn)程和對(duì)該疾病治療的反應(yīng)。

人類(lèi)胚胎干細(xì)胞治療自閉癥:系列病例

ASD的病因有多種因素,包括遺傳、環(huán)境、免疫缺陷、腦炎和病毒因素。研究發(fā)現(xiàn)mecp2基因甲基化受損和突變與ADS相關(guān)。細(xì)胞色素P450酶,特別是CYP27B1基因的遺傳多態(tài)性也與ASD有關(guān)。CYP27B1基因?qū)τ诰S生素D的代謝至關(guān)重要,維生素D在體內(nèi)神經(jīng)元生長(zhǎng)和神經(jīng)發(fā)育中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。據(jù)報(bào)道,自閉癥譜系障礙 (ASD) 患者存在代謝延遲或維生素D缺乏的情況。其他被認(rèn)為導(dǎo)致ASD的因素包括母體抗體轉(zhuǎn)移、母體血液感染、接觸重金屬、產(chǎn)前葉酸缺乏、遺傳性疾病、麻疹和電磁輻射。

自閉癥譜系障礙 (ASD) 無(wú)法治愈;然而,通過(guò)改善智力、社交和身體缺陷、增強(qiáng)功能獨(dú)立性和提高免疫力,可以實(shí)現(xiàn)更好的生活質(zhì)量。干細(xì)胞療法在治療疑難雜癥方面顯示出前景。人們相信干細(xì)胞療法可以減緩或阻止疾病的進(jìn)展。人胚胎干細(xì)胞 (hESC) 具有多能性,可以無(wú)限增殖,并且可以分化成所有細(xì)胞類(lèi)型。這為自閉癥譜系障礙 (ASD) 中使用hESC療法提供了理由。

我們已經(jīng)證明,腦癱和皮質(zhì)視力障礙患者在接受胚胎干細(xì)胞治療后有所改善。在此,我們報(bào)告胚胎干細(xì)胞治療三名自閉癥兒童的效果。

材料和方法

本研究評(píng)估了hESC治療對(duì)三名ASD患者的效果。hESC (NTECH-2000n/nn) 根據(jù)我們?cè)贜utech Mediworld 實(shí)驗(yàn)室的專(zhuān)有專(zhuān)利技術(shù)進(jìn)行培養(yǎng)和維護(hù)(專(zhuān)利號(hào)WO2007/141657A PCT/1B2007年2007年12月13日發(fā)布),該技術(shù)已通過(guò)良好生產(chǎn)規(guī)范認(rèn)證( GTP)、良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范 (GLP) 和良好組織規(guī)范 (GTP)。該研究得到了獨(dú)立機(jī)構(gòu)倫理委員會(huì)(IEC)的批準(zhǔn),并按照“赫爾辛基宣言”規(guī)定的原則進(jìn)行。hESC治療的技術(shù)已在別處描述。

hESC治療策略分為幾個(gè)階段。在第一階段,T1,每天一次肌肉注射(im)0.25ml hESCs(<400萬(wàn)個(gè)細(xì)胞)以“啟動(dòng)”身體,每周兩次靜脈注射1mLhESCs(<1600萬(wàn)個(gè)細(xì)胞)以“回家” ”在所需區(qū)域,每7天通過(guò)補(bǔ)充途徑(例如,通過(guò)硬膜外、腘窩阻滯、臂叢神經(jīng)阻滯、鞘內(nèi)、硬膜外導(dǎo)管尾部、深部脊髓肌肉)施用1至5mL hESC,將干細(xì)胞引入到中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)(局部作用)。每周兩次噴鼻,以增強(qiáng)大腦中hESC的吸收。間隔4至8個(gè)月后,后續(xù)階段——T2(4-6周)、T3(4-6周)和T4(4-6周)——按照與T1相同的劑量方案進(jìn)行給藥。

所有患者的法定監(jiān)護(hù)人在治療前均提供了書(shū)面知情同意書(shū)。在治療之前、期間和之后對(duì)患者的狀況進(jìn)行錄像。在治療開(kāi)始之前進(jìn)行生化和放射學(xué)研究,然后在整個(gè)治療階段定期進(jìn)行。

案例系列

案例1:一名三歲男孩于2012年11月3日入住Nutech Mediworld,家長(zhǎng)抱怨注意力不集中、沒(méi)有目光接觸、沒(méi)有社交互動(dòng)、拍手、無(wú)法指向物體、缺乏功能獨(dú)立性、多嘴、胡言亂語(yǔ)、無(wú)法清晰地說(shuō)話(huà)。

一歲半時(shí),患者父母觀察到他沒(méi)有眼神交流,對(duì)自己的名字沒(méi)有反應(yīng),也不和別人玩。他在兩歲時(shí)被診斷出患有自閉癥譜系障礙,從那時(shí)起,他一直在接受職業(yè)和言語(yǔ)治療。

患者病史顯示,他因逾期(13天)而通過(guò)下(子宮)段剖腹產(chǎn)術(shù)(LSCS)出生,且產(chǎn)程沒(méi)有進(jìn)展。

經(jīng)調(diào)查,大腦單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層掃描 (SPECT) 掃描顯示雙側(cè) (B/L) 額葉和B/L顳區(qū)中度至重度灌注不足。在B/L頂葉區(qū)域和B/L小腦區(qū)域觀察到中度灌注不足。

從2012年11月3日到2012年12月29日,患者接受了hESC作為主要治療,同時(shí)進(jìn)行職業(yè)和物理治療,為期八周。在第一次hESC治療后,患者的眼神交流、社交能力等方面均有所改善。行為和說(shuō)話(huà),并能夠遵循基本命令,例如“扔球”和“拿球”。張嘴和拍手的次數(shù)也減少了。

間隔四個(gè)月后,患者返回接受第二次治療。自從他上次隨訪以來(lái),他的父母報(bào)告說(shuō),他表現(xiàn)出尋求關(guān)注的行為、搖晃身體和發(fā)脾氣。他遵循的命令較少,目光接觸的時(shí)間也較短。第二次治療后,患者的眼神交流、詞匯量和社交意識(shí)都有所改善。他很頑皮,對(duì)父母產(chǎn)生了感情。患者的功能獨(dú)立性也有所改善(例如,他開(kāi)始自己穿涼鞋)。

第二次治療后的大腦SPECT掃描顯示左側(cè)小腦區(qū)域有輕微的灌注不足。大腦和小腦區(qū)域的灌注顯著改善。圖1代表患者在第二次治療之前和之后的SPECT掃描圖像。

圖1,案例1。人胚胎干細(xì)胞治療前后的單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層掃描——灰色:正常;紅色、粉色、白色:高于正常;
綠色、淺藍(lán)色、深藍(lán)色、黑色:灌注不足的區(qū)域

2013年10月28日,該患者接受第三次hESC治療。治療后,他的表情和注意力有所改善,發(fā)脾氣和張嘴現(xiàn)象也明顯減少,但仍然存在。

總體而言,經(jīng)過(guò)三個(gè)治療療程后,患者的目光接觸和注意力持續(xù)時(shí)間得到改善,并且張口次數(shù)顯著減少。他能夠聽(tīng)從指示,功能獨(dú)立性有所提高,很頑皮,社會(huì)意識(shí)和對(duì)父母的情感依戀都有所提高。

病例2:一名10歲男孩,言語(yǔ)障礙,說(shuō)話(huà)和行走不協(xié)調(diào),智商低,認(rèn)知障礙,注意力不集中,于2011年6月20日入住Nutech Mediworld。

病史顯示,患者是在產(chǎn)鉗輔助下引產(chǎn)的。兩歲時(shí),他出現(xiàn)言語(yǔ)遲緩、注意力不集中以及認(rèn)知障礙的跡象。他的兒科神經(jīng)科醫(yī)生診斷他患有自閉癥譜系障礙(ASD)和小兒急性發(fā)作神經(jīng)精神綜合征。患者還經(jīng)?;加泻粑栏腥?。美食插入(B/L)也在五歲時(shí)發(fā)生。2007年,他患有萊姆病綜合癥,并接受了高壓氧療法 (HBOT) 的完整萊姆病治療方案。他還患有重金屬中毒,接受了乙二胺四乙酸(EDTA)、二巰基丙磺酸(DMPS)和HBOT治療。

檢查時(shí),患者三頭肌反射減弱,言語(yǔ)不清且語(yǔ)無(wú)倫次。他表現(xiàn)出感官知覺(jué)受損和強(qiáng)迫癥(OCD)的跡象。他對(duì)噪音和氣味過(guò)敏,視力弱,并且有夜驚癥。

2011年6月21日對(duì)他進(jìn)行了腦SPECT掃描,結(jié)果顯示B/L顳區(qū)灌注中度至嚴(yán)重減少,B/L小腦區(qū)嚴(yán)重灌注不足。

在我們的機(jī)構(gòu),患者接受了hESC治療作為主要治療。經(jīng)過(guò)四次治療后,他的認(rèn)知能力和溝通能力都有所提高。他的手眼協(xié)調(diào)能力得到了改善,言語(yǔ)能力也得到了改善,并且可以同時(shí)完成多項(xiàng)任務(wù)。他對(duì)嗅覺(jué)/聽(tīng)覺(jué)刺激的過(guò)敏減輕了,身體變得強(qiáng)壯,免疫系統(tǒng)也得到了改善。治療后,2013年7月1日對(duì)他進(jìn)行的SPECT掃描顯示腦灌注流量正常。在大腦和小腦區(qū)域觀察到的灌注程度顯著降低(圖2)。

圖2,案例 2。人胚胎干細(xì)胞治療前后的單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層掃描——灰色:正常;紅色、粉色、白色:高于正常;
綠色、淺藍(lán)色、深藍(lán)色、黑色:灌注不足的區(qū)域

案例3:一名精細(xì)運(yùn)動(dòng)和溝通能力受損的四歲男孩于2012年3月27日被送入 Nutech Mediworld。他在達(dá)到發(fā)育里程碑方面表現(xiàn)出延遲,包括言語(yǔ)、拍手和行為攻擊。

出生前,他的母親患有妊娠糖尿病、橋本甲狀腺炎和α地中海貧血。患者已足月并正常分娩,但出生后未自發(fā)哭泣。他被診斷患有輕度自閉癥譜系障礙和整體發(fā)育遲緩。

2012年3月22日對(duì)他進(jìn)行了腦部SPECT成像,結(jié)果顯示B/L額葉和顳葉以及B/L小腦區(qū)域分別有輕度至中度灌注不足。

該患者從2012年3月27日至2014年9月27日接受了四次hESC治療,之后他的社交互動(dòng)、目光接觸、智力和運(yùn)動(dòng)技能都有所改善。他可以說(shuō)出簡(jiǎn)短的句子并遵循命令。與之前的掃描相比,2014年1月9日的SPECT掃描顯示腦灌注流量正常(圖3)。

圖3,案例3。人胚胎干細(xì)胞治療前后的單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層掃描——灰色:正常;紅色、粉色、白色:高于正常;
綠色、淺藍(lán)色、深藍(lán)色、黑色:灌注不足的區(qū)域

討論

我們的三名患者的SPECT掃描顯示胚胎干細(xì)胞治療后腦血灌注顯著改善。我們通過(guò)使用核成像來(lái)確定這種改善——一種用于檢查器官功能和大腦血液灌注程度的測(cè)試。SPECT掃描是確定腦血流量、腦損傷和局部腦代謝的重要工具。此外,SPECT掃描對(duì)于檢測(cè)大腦異常非常敏感。

三名患有自閉癥譜系障礙 (ASD) 的兒科患者在hESC治療后表現(xiàn)出溝通、寫(xiě)作和認(rèn)知技能的顯著改善。我們的患者在平衡和言語(yǔ)方面表現(xiàn)出改善,不再拍手,變得更加平靜,身體更加強(qiáng)壯。我們還觀察到一名患有眼睛相關(guān)問(wèn)題的患者的眼睛炎癥有所減輕。

自閉癥譜系障礙(ASD)是一種與大腦相關(guān)的疾病,其特征是免疫系統(tǒng)受損。自閉癥譜系障礙 (ASD) 最常見(jiàn)的診斷病理是中樞神經(jīng)系統(tǒng)循環(huán)受損、大腦灌注不足以及免疫系統(tǒng)薄弱并伴有大腦神經(jīng)炎癥。也有人認(rèn)為,沒(méi)有可診斷原因的自閉癥譜系障礙是一種遺傳性疾病,因?yàn)榕c一般人群相比,其兄弟姐妹中的復(fù)發(fā)率很高。

沒(méi)有治療ASD的標(biāo)準(zhǔn)方法。除了教育和物理治療干預(yù)外,該疾病還經(jīng)常使用抗精神病藥物、17種精神興奮劑和抗抑郁藥物進(jìn)行治療。hESC的分離在治療各種無(wú)法治愈的疾病方面顯示出了前景。最近的許多研究支持使用hESC治療ASD。

研究還強(qiáng)調(diào)了間充質(zhì)干細(xì)胞 (MSC) 治療自閉癥的應(yīng)用,它可以從hESC中分離或產(chǎn)生。使用MSC治療ASD的單一注冊(cè)人體臨床試驗(yàn) (?NCT01343511;http://www.clinicaltrials.gov)旨在測(cè)試人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和人臍帶血單核細(xì)胞移植在中國(guó)自閉癥譜系障礙患者中的??安全性和有效性。

干細(xì)胞治療自閉癥的作用機(jī)制可能涉及糾正灌注不足和免疫調(diào)節(jié)。給予ASD患者的22個(gè)MSC會(huì)遷移到受影響的區(qū)域,并釋放促進(jìn)生存的生長(zhǎng)因子和抗炎細(xì)胞因子,從而恢復(fù)可塑性。這種作用機(jī)制可能可以解釋我們?cè)谘芯炕颊咧锌吹降膕ESC治療后的改善。研究期間,我們的患者沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何不良反應(yīng)。

結(jié)論

我們的患者在接受胚胎干細(xì)胞治療后,健康狀況、社交技能、免疫力和認(rèn)知能力均有所改善。胚胎干細(xì)胞治療后的SPECT掃描反映了腦血流灌注的改善。這是第一項(xiàng)報(bào)告胚胎干細(xì)胞治療自閉癥中可能發(fā)揮的潛在作用的研究。對(duì)更大樣本患者的研究可能為更有效地使用hESC提供更好的證據(jù)。

參考資料:Shroff G. Human Embryonic Stem Cells in the Treatment of Autism: A Case Series. Innov Clin Neurosci. 2017 Apr 1;14(3-4):12-16. PMID: 28584692; PMCID: PMC5451033.

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