2021 年是中國(guó)細(xì)胞治療領(lǐng)域的元年，時(shí)至今日，6 款產(chǎn)品獲得 FDA 批準(zhǔn)，3 款在中國(guó)上市?；谝寻l(fā)布的 2022 年上半年財(cái)報(bào)[1-4]，CAR-T 細(xì)胞治療全球總銷(xiāo)售額已超 10 億美金。

CAR-T 細(xì)胞制備流程包括以下幾個(gè)步驟：

① 抽取血樣，白細(xì)胞分離；

② 在 GMP 環(huán)境下，準(zhǔn)備 CAR 基因，進(jìn)行 CAR 基因轉(zhuǎn)導(dǎo)，獲取 CAR-T 細(xì)胞

③ CAR-T 細(xì)胞擴(kuò)增，純化，并進(jìn)行質(zhì)量控制檢查；

④ 運(yùn)送回治療機(jī)構(gòu)，病人先進(jìn)行淋巴細(xì)胞清除化療，再輸注 CAR-T；

⑤ CAR-T 細(xì)胞識(shí)別并殺傷癌細(xì)胞。

Cancers 2021, 13, 5181（原始圖來(lái)自于 NCI-NIH）[5]

血液腫瘤

CAR-T 細(xì)胞治療，徹底改變了血液系統(tǒng)惡性腫瘤的治療結(jié)果。CD19 CAR-T 臨床適應(yīng)癥主要為難治性大 B 細(xì)胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、急性淋巴細(xì)胞性白血病等，BCMA CAR-T 則針對(duì)多發(fā)性骨髓瘤。
CAR-T 總體反應(yīng)率在 52-85%，完全應(yīng)答率達(dá)到 33-59%[5-7]，優(yōu)于單克隆抗體藥物（如Tafasitamab）、小分子抑制劑（如Selinexor）、ADC 藥物（如Polatuzumab vedotin）等。

目前 FDA 已經(jīng)批準(zhǔn)了六款 CAR-T 細(xì)胞治療產(chǎn)品，具體數(shù)據(jù)參考下表。

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實(shí)體瘤

針對(duì)實(shí)體瘤（如肝細(xì)胞癌、胃癌、黑色素瘤、前列腺癌、卵巢癌等），目前雖然進(jìn)行了數(shù)百項(xiàng) CAR-T 臨床研究，比如 Mesothelin（29 項(xiàng)），HER2 和 GD（各 26 項(xiàng)），GPC3（23 項(xiàng)）CEA 和 CLDN 18.2（各 10 項(xiàng)），除去 CLDN 18.2（科濟(jì) CT041）取得 ORR 48% 的療效，其余靶點(diǎn)大多無(wú)應(yīng)答[8]。

可及性

目前 CAR-T 細(xì)胞治療依然采用個(gè)體化生產(chǎn)，產(chǎn)能有限、生產(chǎn)周期長(zhǎng)，且成本高昂，影響患者可及性。

治療相關(guān)副作用

作為免疫治療產(chǎn)品，CAR-T 存在免疫相關(guān)一些副作用，包括細(xì)胞因子風(fēng)暴（CRS）和神經(jīng)毒性等，如上表統(tǒng)計(jì) 6 已經(jīng)上市產(chǎn)品[5-7]。此外，脫靶毒性等也是不能忽略的問(wèn)題。

原發(fā)性耐藥

部分腫瘤細(xì)胞對(duì)于 CAR-T 治療不敏感，無(wú)法產(chǎn)生消退。

復(fù)發(fā)問(wèn)題

從長(zhǎng)時(shí)間看，細(xì)胞治療產(chǎn)生消退的患者，如多發(fā)性骨髓瘤 50% 以上會(huì)復(fù)發(fā)（無(wú)進(jìn)展生存期小于 12 個(gè)月）[7]。

實(shí)體瘤

目前 CAR-T 治療實(shí)體瘤，應(yīng)答率和有效率都極低，相關(guān)機(jī)制討論中，涉及缺乏特異性腫瘤相關(guān)抗原，物理屏障阻隔 CAR-T 穿透入實(shí)體瘤內(nèi)部，惡劣的腫瘤微環(huán)境誘導(dǎo) CAR-T 功能耗竭等。

除了以上挑戰(zhàn)之外，CAR-T 細(xì)胞的質(zhì)量控制，臨床前試驗(yàn)?zāi)Ｐ偷娜狈Φ纫彩茄邪l(fā)和臨床申報(bào)中廣泛面臨的問(wèn)題。

現(xiàn)貨型CAR-T解決可及性問(wèn)題

現(xiàn)貨型 CAR-T 的優(yōu)勢(shì)：

1. 可提前制備，直接使用；

2. 可批量生產(chǎn)，降低成本；

3. 產(chǎn)品質(zhì)量與患者個(gè)體狀況無(wú)關(guān)。

現(xiàn)貨型 CAR-T 的開(kāi)發(fā)策略：宿主同種異體 T 細(xì)胞識(shí)別未修飾 T 細(xì)胞上不匹配的人類(lèi)白細(xì)胞抗原(HLAs)，引起排斥反應(yīng)。一些宿主 NK 細(xì)胞也可能感覺(jué)到不匹配的 T 細(xì)胞上某些宿主 HLAI 類(lèi)分子的缺乏，促進(jìn)排斥?，F(xiàn)貨型 CAR-T 主要開(kāi)發(fā)邏輯是阻斷移植排斥反應(yīng)。常用的策略包括：

▲ 敲除引起移植排斥反應(yīng)的 HLA 分子；

▲ 過(guò)表達(dá) HLA-E/G 或 CD47；

▲ 在現(xiàn)貨型 CAR-T 細(xì)胞上保留 HLA-C 和非經(jīng)典的 HLAI 類(lèi)分子；

▲ 主動(dòng)的方法可以通過(guò)非選擇性抑制宿主免疫(清除宿主淋巴細(xì)胞，包括 CD52/CD38 單克隆抗體和 FOLFOX)；

▲ 選擇性消除激活的同種異體反應(yīng)性淋巴細(xì)胞。

但現(xiàn)貨型 CAR-T，基因敲除可能會(huì)引起 T 細(xì)胞染色體異常[13]，存在安全性問(wèn)題，該技術(shù)的先驅(qū) Cellectis 和 Allogene 多次被叫停臨床研究。

CAR-M、CAR-NK 等多種 CAR 細(xì)胞

除了 CAR-T 之外，使用 CAR 武裝另外一個(gè)免疫效應(yīng)細(xì)胞（NK 細(xì)胞）也成為研究熱點(diǎn)。CAR-NK 有多種優(yōu)勢(shì)，比如對(duì)移植排斥反應(yīng)天然抵抗，可以使用臍帶血干細(xì)胞分化產(chǎn)生 NK 細(xì)胞，因而天然具有現(xiàn)貨型 CAR 細(xì)胞的特征；體內(nèi)半衰期短，可以降低毒副作用的考量。不過(guò)，現(xiàn)在只有 30 多個(gè)臨床開(kāi)展，還沒(méi)有獲得令人振奮的臨床結(jié)果，開(kāi)發(fā)尚需時(shí)間。

CAR-M 巨噬細(xì)胞是抗原遞呈細(xì)胞，CAR-M 增加抗原遞呈能力，激活體內(nèi)的 T 細(xì)胞，從而發(fā)揮抗腫瘤活性。但其臨床有效性也同樣需要時(shí)間來(lái)檢驗(yàn)。

無(wú)論是 CAR 基因改造還是在多種 CAR 細(xì)胞中尋找最優(yōu)答案，都對(duì)操作環(huán)境、設(shè)備及操作符合規(guī)范的要求尤其嚴(yán)格。Eppendorf  系列產(chǎn)品不僅可以實(shí)現(xiàn) CAR-T 細(xì)胞產(chǎn)品研發(fā)生產(chǎn)中的安全性、質(zhì)量可控性、產(chǎn)品工藝一致性及數(shù)據(jù)合規(guī)性，更有高效節(jié)能和用戶(hù)友好的特點(diǎn)。

參考資料：

[1]https://s21.q4cdn.com/104148044/files/doc_financials/quarterly_reports/2022/BMY-Q22022-Earnings-Press-Release.pdf[2]https://www.novartis.com/sites/novartis_com/files/q2-2022-media-release-en.pdf[3]https://s29.q4cdn.com/585078350/files/doc_financials/2022/q2/Gilead-Sciences-Q222-Earnings-Press-Release-2-August-2022.pdf
[4]https://www1.hkexnews.hk/listedco/listconews/sehk/2022/0721/2022072101231_c.pdf
[5]Crees, Z.D.; Ghobadi, A. Cellular Therapy Updates in B-Cell Lymphoma: The State of the CAR-T. Cancers 2021, 13, 5181
[6]Nikhil C. Munshi et al, Idecabtagene Vicleucel in Relapsed and Refractory Multiple Myeloma, N Engl J Med . 2021 Feb 25;384(8):705-716.
[7]Jesus G Berdeja et al，Ciltacabtagene autoleucel, a B-cell maturation antigen directed chimeric antigen receptor T-cell therapy in patients with relapsed or refractory multiple myeloma (CARTITUDE-1): a phase 1b/2 open-label study，Lancet 2021; 398: 314–24
[8]Victor Moreno et al, Adoptive cell therapy for solid tumors: Chimeric antigen receptor T cells and beyond，Current Opinion in Pharmacology 2021, 59:70–84
[9]Mehmet Kemal Samur et al, Biallelic loss of BCMA as a resistance mechanism to CAR T cell therapy in a patient with multiple myeloma, NATURE COMMUNICATIONS | (2021) 12:868 | https://doi.org/10.1038/s41467-021-21177-5
[10]Xu X, Huang S, Xiao X, Sun Q, Liang X, Chen S, Zhao Z, Huo Z, Tu S and Li Y (2021) Challenges and Clinical Strategies of CAR T-Cell Therapy for Acute Lymphoblastic Leukemia: Overview and Developments. Front. Immunol. 11:569117
[11]Feiyan Mo et al, Taking T-Cell Oncotherapy Off-the-Shelf, Trends Immunol. 2021 Mar;42(3):261-272.
[12]Nahmad, A.D., Reuveni, E., Goldschmidt, E. et al. Frequent aneuploidy in primary human T cells after CRISPRCas9 cleavage. Nat Biotechnol (2022). https://doi.org/10.1038/s41587-022-01377-0
[13]Larson RC, Maus MV.Recent advances and discoveries in the mechanisms and functions of CAR T cells, Nat Rev Cancer . 2021 Mar;21(3):145-161.