女性生殖系統(tǒng)的典型病癥是多囊卵巢綜合癥（PCOS）。高胰島素血癥、胰島素抵抗、肥胖和雄激素過多癥只是與這種疾病相關(guān)的一些代謝異常。2型糖尿病、高血壓和心血管疾病是與PCOS相關(guān)的其他問題。這種綜合征的一個(gè)后果是不孕，為此已經(jīng)開發(fā)了多種治療方法。二甲雙胍和克羅米芬是兩種用于治療多囊卵巢綜合癥的常見對抗療法藥物，兩者都有缺點(diǎn)且無效。尋求新的治療方式來解決這些限制至關(guān)重要。

近年來，干細(xì)胞及其中的干細(xì)胞外泌體領(lǐng)域新技術(shù)迅速發(fā)展；因此，希望這些元素能夠成功治療該綜合征并應(yīng)用于臨床研究。圖1展示了使用和不使用細(xì)胞干細(xì)胞及其外泌體衍生物的多囊卵巢綜合癥研究歷史。

圖1：基于Scopus、PubMed和Web of Science報(bào)告對PCOS的科學(xué)關(guān)注：

(A) 2000年至2024年有關(guān)含有和不含有干細(xì)胞和EXO的PCOS的已發(fā)表文章數(shù)量，

B)含有和不含有干細(xì)胞和EXO的有關(guān)PCOS的已發(fā)表文獻(xiàn)類型沒有干細(xì)胞和EXO，

(C)對有和沒有干細(xì)胞和EXO的不同分支PCOS的科學(xué)關(guān)注統(tǒng)計(jì)。

外泌體（EXO）是細(xì)胞釋放的一類特殊的細(xì)胞外囊泡，已知它們在介導(dǎo)細(xì)胞間通訊中發(fā)揮重要作用。納米級脂質(zhì)雙層外泌體中含有多種物質(zhì)，包括脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和許多其他非編碼RNA。干細(xì)胞和源自它們的EXO的細(xì)胞因子作用能夠防御多囊卵巢綜合癥等代謝疾病。此外，EXO microRNA有可能用作PCOS檢測和管理的生物標(biāo)志物。

近日，《內(nèi)分泌學(xué)前沿》發(fā)布了一篇《干細(xì)胞和外泌體可作為診斷和治療多囊卵巢綜合征的生物制劑》的文章，在這項(xiàng)研究中，專門研究了干細(xì)胞和外泌體在診斷和治療女性生殖系統(tǒng)疾病之一的多囊卵巢綜合癥中的潛力。

多囊卵巢綜合癥的的原因、診斷、治療方法

多囊卵巢綜合癥是一種影響育齡婦女的常見代謝和內(nèi)分泌疾病。它是育齡婦女（ 13-16歲）不孕的重要因素和主要原因。

雄激素水平升高、排卵問題和形態(tài)異常都是多囊卵巢綜合征 (PCOS) 疾病的癥狀。美國國立衛(wèi)生研究院 (NIH) 將 PCOS 定義為“雄激素過多癥伴排卵障礙”。至少6%至10%的處于生育期的女性會出現(xiàn)這種情況，盡管頻率建議高出兩倍。

多囊卵巢綜合癥的原因

PCOS的確切病因和病理學(xué)尚不完全清楚；然而，黃體生成素（LH）與卵泡刺激素（FSH）的高比例以及促性腺激素釋放激素（GnRH）過量被認(rèn)為是其基本特征。有證據(jù)表明，遺傳、表觀遺傳學(xué)、雄激素過多癥（HA）、胰島素抵抗（IR）和環(huán)境因素等內(nèi)部和外部因素可能與多囊卵巢綜合征的發(fā)生有關(guān)。還需要注意的是，PCOS會增加各種疾病的風(fēng)險(xiǎn)，包括2型糖尿病、焦慮、心臟病、抑郁癥和代謝綜合征。PCOS陽性女性通常表現(xiàn)出低度慢性炎癥。

最近的研究表明，對于患有多囊卵巢綜合癥的身材苗條、胰島素敏感的女性，使用抗炎藥物可以減少卵巢雄激素的釋放并促進(jìn)排卵。有趣的是，即使在 PCOS 中不存在胰島素抵抗的情況下，數(shù)據(jù)也清楚地表明炎癥在卵巢功能障礙背后的潛在機(jī)制中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。

多囊卵巢綜合癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)

為了診斷成年女性的多囊卵巢綜合癥，通常采用鹿特丹多囊卵巢綜合癥標(biāo)準(zhǔn)，該標(biāo)準(zhǔn)要求存在三分之二的發(fā)現(xiàn)：臨床和/或生化雄激素過多癥、少排卵和超聲多囊卵巢形態(tài)。然而，診斷青少年多囊卵巢綜合癥可能具有挑戰(zhàn)性，因?yàn)槠浒Y狀與青春期的正常變化有顯著重疊，使得準(zhǔn)確診斷在大多數(shù)時(shí)候都很困難。多囊卵巢綜合癥 (PCOS) 不僅僅是一種卵巢疾病。它現(xiàn)在被認(rèn)為是一種復(fù)雜的、多因素的、多基因的、炎癥的、類固醇失調(diào)狀態(tài)的自身免疫性多系統(tǒng)疾病。

PCO的合并癥可分為三大類：代謝性、生殖性和心理性。月經(jīng)不調(diào)、生育力低下、胰島素抵抗、肥胖、心血管疾病、焦慮、抑郁以及生活質(zhì)量低下是PCOS的主要合并癥和后果。

多囊卵巢綜合癥傳統(tǒng)治療方法

根據(jù)指南，目前還沒有針對PCOS根本原因的確切治療方法，但癥狀治療和預(yù)防與PCOS相關(guān)的長期發(fā)病是當(dāng)今流行的治療方法，可以通過減輕5-10%的體重和/或?qū)τ谏形椿謴?fù)排卵的女性，聯(lián)合使用口服避孕藥和促排卵藥物（如來曲唑、克羅米芬和二甲雙胍）（圖2）。由于確定了患有PCOS的青少年和女性治療中存在相關(guān)困難，因此制定了基于證據(jù)的國際PCOS建議，強(qiáng)調(diào)在整個(gè)生殖壽命期間對PCOS進(jìn)行預(yù)防、篩查和治療。

干細(xì)胞的基礎(chǔ)知識

干細(xì)胞是生物體內(nèi)最重要、最重要的細(xì)胞之一，具有獨(dú)特的特性。干細(xì)胞的兩個(gè)重要且主要的特征是它們分化成不同形式的特化細(xì)胞，以及只要有機(jī)體活著，它們就可以無限分裂而不分化。干細(xì)胞的這兩個(gè)特征是它們所經(jīng)歷的分裂類型的結(jié)果。首先，干細(xì)胞可以進(jìn)行對稱分裂，從而產(chǎn)生兩個(gè)子細(xì)胞，每個(gè)子細(xì)胞都保留了全部干細(xì)胞潛力。第二種分裂稱為不對稱分裂，其中產(chǎn)生一個(gè)干細(xì)胞，保留其干細(xì)胞特性，并產(chǎn)生一個(gè)祖細(xì)胞，其自我更新潛力降低。

干細(xì)胞根據(jù)其來源分為四種主要類型：胚胎干細(xì)胞（ESC）、胎兒干細(xì)胞（FSC）、成體干細(xì)胞（ASC）和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSC）。每種類型都有獨(dú)特的特征和分化潛力，使它們對各種研究和醫(yī)學(xué)應(yīng)用有價(jià)值。胚胎干細(xì)胞是由囊胚內(nèi)層的外胚層衍生而來，可轉(zhuǎn)化為外胚層、內(nèi)胚層和中胚層三個(gè)初級胚層。

FSC是一類干細(xì)胞，源自三種主要細(xì)胞系：胎兒造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞 (NSC) 和胎兒MSC。這些FSC具有分裂、增殖和分化為特殊細(xì)胞類型的能力。這些細(xì)胞系源自胎兒組織，并表現(xiàn)出根據(jù)需要分裂、增殖和分化成特定細(xì)胞類型的能力。ASC或成體干細(xì)胞是存在于出生后成人組織中的細(xì)胞系，可以是單能或多能的。這種分化程度較低的細(xì)胞系是產(chǎn)生其他類型細(xì)胞的起源，并且可以分為幾種細(xì)胞類型，即表皮干細(xì)胞（EDSC）、NSC、MSC和造血干細(xì)胞（HSC）。

產(chǎn)生三個(gè)分化的初級胚層的干細(xì)胞的一種形式是IPSC，它是由成體干細(xì)胞產(chǎn)生的。因?yàn)樗鼈冊醋曰颊叩捏w細(xì)胞，所以排斥的風(fēng)險(xiǎn)較低。間充質(zhì)干細(xì)胞的來源包括臍帶、骨髓和脂肪組織。此前的臨床前和臨床試驗(yàn)表明，間充質(zhì)干細(xì)胞可有效治療多種女性生殖疾病，可用于治療多囊卵巢綜合征。其他干細(xì)胞分類是基于區(qū)分全能、多能和專能的能力。轉(zhuǎn)化為分化細(xì)胞的能力從第一類到第三類分別降低。根據(jù)上述內(nèi)容和最近的研究，可以推測干細(xì)胞具有治療多種疾病的高能力（圖3）。

(A)干細(xì)胞的對稱和不對稱分裂，(B)干細(xì)胞分為不同類型，包括ESC、FSC、ASC和iPSC。

外泌體：定義及其在多囊卵巢綜合癥治療中的應(yīng)用

最初，人們認(rèn)為細(xì)胞外囊泡（EVs）是從質(zhì)膜直接萌發(fā)的；然而，正如潘和哈丁在 20世紀(jì)80年代發(fā)現(xiàn)的那樣，成網(wǎng)狀細(xì)胞分泌的EVs具有更復(fù)雜的分泌模式。細(xì)胞通訊主要由EVs介導(dǎo)，EVs曾被稱為細(xì)胞垃圾。

EXOs（40到120納米）是三種EV亞型中最小的一種。由于其獨(dú)特性，該領(lǐng)域的先驅(qū)約翰斯頓于1987年首次將這種EV命名為 “外泌體”。多囊體（MVB）與質(zhì)膜融合時(shí)產(chǎn)生外泌體。MVB是通過內(nèi)吞過程吸收的，而內(nèi)吞過程是由許多過程控制的，這些過程也支配著早期內(nèi)體的發(fā)育和質(zhì)膜的內(nèi)部出芽。各種有效載荷被分揀到腔內(nèi)囊泡（ILV）中，在早期內(nèi)體中產(chǎn)生MVB，而一部分蛋白質(zhì)則被送回質(zhì)膜。最后，完整的MVB也可能與溶酶體合并進(jìn)行降解，或與質(zhì)膜合并，以EXO的形式排出ILV。近幾十年來，EXOs已被證明具有作為運(yùn)輸工具的潛力，并含有多種成分，如miRNA、核酸RNA和蛋白質(zhì)，它們在細(xì)胞外通訊中發(fā)揮著重要作用（圖4）。

與MSC一樣，MSC-EXO具有抑制免疫反應(yīng)和炎癥的先天能力。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞產(chǎn)生的EXO已被證明可以通過增加免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的產(chǎn)生、減少γ干擾素表達(dá)和轉(zhuǎn)錄因子以及限制局部炎癥反應(yīng)來影響免疫系統(tǒng)。此外，MSC衍生的EXO（MSC-EXO）通過刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖而表現(xiàn)出血管生成作用。許多生物過程，包括繁殖、組織更新和修復(fù)以及胚胎發(fā)育，都依賴于這些EXO。它們調(diào)節(jié)這些過程的能力使它們成為各種治療應(yīng)用的有希望的候選者，特別是在促進(jìn)組織修復(fù)和改善生殖結(jié)果方面。

根據(jù)研究結(jié)果，間充質(zhì)干細(xì)胞衍生的外泌體是在體外模型中控制雄激素合成并在多囊卵巢綜合征小鼠模型中恢復(fù)生育能力的重要分子。在多囊卵巢綜合癥的背景下，靜脈注射和卵巢內(nèi)注射都顯示出新的治療潛力。在血糖控制等全身調(diào)節(jié)中，靜脈注射可產(chǎn)生更有利的結(jié)果。相反，卵巢內(nèi)注射在恢復(fù)卵巢功能方面表現(xiàn)出更大的功效。盡管我們未來的研究需要更多的臨床試驗(yàn)，但MSC衍生的外泌體可能為PCOS患者提供有希望的治療選擇。

來曲唑誘導(dǎo)PCOS后，對雌性大鼠進(jìn)行無細(xì)胞治療（干細(xì)胞和外泌體的條件培養(yǎng)基 (CM)）。根據(jù)該研究結(jié)果，用BM-MSC產(chǎn)生的EXO和CM治療PCOS似乎很有希望。然而，BM-MSC衍生的CM在生化、形態(tài)和功能方面優(yōu)于BM-MSC衍生的外泌體。這可能是因?yàn)槌薊XO之外，CM還包含許多其他生物成分（表1）。

干細(xì)胞治療多囊卵巢綜合癥的應(yīng)用

基于MSC的療法因其免疫調(diào)節(jié)活性（特別是在炎癥相關(guān)疾病中）以及其分化潛力和自我更新能力而成為PCOS的潛在有益替代方案。廣泛的研究揭示了間充質(zhì)干細(xì)胞主要通過旁分泌信號通路改善和修復(fù)卵巢生育能力的能力。RAP1/NFkb信號通路在控制MSC活動中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。

間充質(zhì)干細(xì)胞的功能受到其旁分泌活性的顯著影響，調(diào)節(jié)炎癥和免疫反應(yīng)，促進(jìn)組織愈合，并促進(jìn)祖細(xì)胞分化為專門的組織細(xì)胞。研究表明，患有多囊卵巢綜合癥的女性經(jīng)常會出現(xiàn)慢性炎癥；因此，他們更有可能患上2型糖尿病 (DMT2)、代謝綜合征、肥胖和胰島素抵抗?；贛SC的治療有望解決潛在的炎癥和恢復(fù)卵巢功能，使其成為治療PCOS及其相關(guān)并發(fā)癥的潛在治療方法。

研究結(jié)果表明，多囊卵巢綜合癥患者的卵母細(xì)胞體外成熟（IVM）效果不佳。然而，間充質(zhì)干細(xì)胞分泌多種生長因子和細(xì)胞因子，有助于卵母細(xì)胞的成熟。一項(xiàng)研究表明，在IVM培養(yǎng)基中添加50%人骨髓間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)基 (hBM-MSC-CM) 可顯著提高受精率以及生殖囊泡 (GV) 卵母細(xì)胞的核和細(xì)胞質(zhì)成熟。它還導(dǎo)致多囊卵巢綜合癥小鼠的囊胚形成和發(fā)育卵母細(xì)胞的兩細(xì)胞率增加。這些發(fā)現(xiàn)表明，MSC分泌的因子可以在體外手術(shù)過程中對PCOS患者的卵母細(xì)胞成熟產(chǎn)生積極影響。

2022年8月14日，吉林大學(xué)周虛教授、李純錦教授團(tuán)隊(duì)在國際權(quán)威雜志Biomaterials上發(fā)表題為“Adipose mesenchymal stem cell-derived exosomal microRNAs ameliorate polycystic ovary syndrome by protecting against metabolic disturbances”的研究論文（2022, 14:121739），闡述了脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體通過防止代謝紊亂改善多囊卵巢綜合征的機(jī)制。

該研究首先用脫氫表雄酮（DHEA）誘導(dǎo)PCOS模型大鼠，使用AMSCs和AMSC-EXOs治療改善了大部分PCOS癥狀。

進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，AMSC-EXOs主要富集在大鼠肝臟組織中，進(jìn)行肝臟RNAseq和AMSC-EXOs的miRNA豐度測序，通過基因聯(lián)合分析找到miR-21-5p靶向Btg2基因。

為了驗(yàn)證miR-21-5p和Btg2基因之間的關(guān)系，使用大鼠肝細(xì)胞進(jìn)行分子機(jī)制研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AMSC-EXOs通過攜帶miR-21-5p靶向Btg2基因促進(jìn)了肝細(xì)胞對葡萄糖的攝取能力，并且在這過程中激活了p-IRS1和p-AKT通路。

為了證明是AMSC-EXOs通過攜帶miR-21-5p改善PCOS大鼠代謝進(jìn)而改善PCOS相關(guān)病癥，該研究將AMSC-EXOs中miR-21-5p屏蔽掉，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其不能改善PCOS大鼠癥狀，并且不會激活肝臟組織p-IRS1和p-AKT通路以及不會促進(jìn)肝細(xì)胞對葡萄糖的攝取能力。

研究結(jié)果為干細(xì)胞外泌體用于臨床治療多囊卵巢綜合征提供了新思路，也為研究動物卵泡囊腫的防治奠定了理論基礎(chǔ)。

此外，根據(jù)對PCOS病因的研究，炎癥和氧化應(yīng)激可能導(dǎo)致該病的病理生理學(xué)。因此，針對前面提到的系統(tǒng)可能是一種有效的治療方法。由于其免疫調(diào)節(jié)、抗氧化和抗凋亡特性，BM-MSC被用于治療許多炎癥性疾病。此外，已表明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植可有效治療卵巢功能障礙疾病和損傷。

接受BM-MSC治療的PCOS患者的卵巢、皮質(zhì)和卵母細(xì)胞總量顯著增加；透明帶厚度；與PCOS疾病相比，竇卵泡的數(shù)量以及竇前卵泡和初級卵泡的數(shù)量顯著減少。此外，在接受BM-MSC治療的PCOS患者中，血液FSH和TAC水平顯著升高，而LH、睪酮和MDA水平以及TUNEL陽性凋亡細(xì)胞比例大幅下降(表2)。

結(jié)論

我們在這里為開發(fā)用于多囊卵巢綜合癥相關(guān)生育治療的新型細(xì)胞（干細(xì)胞）和無細(xì)胞（EXO）診斷和治療方法提供了潛在的成功途徑。最近的研究表明，干細(xì)胞和干細(xì)胞外泌體可以抑制炎癥和細(xì)胞凋亡，控制類固醇生成，并在體內(nèi)和體外阻止雄激素的合成。這項(xiàng)研究也提高了我們對干細(xì)胞外泌體治療多囊卵巢綜合癥患者的miRNA表達(dá)譜的了解。因此，值得挑戰(zhàn)這些化合物在治療多囊卵wmt巢綜合征中的有效性和效率。

我們預(yù)計(jì)，隨著干細(xì)胞外泌體和干細(xì)胞研究的進(jìn)一步發(fā)展，這兩個(gè)課題將能夠?yàn)槎嗄衣殉簿C合癥的早期和更精確的診斷做出重大貢獻(xiàn)，并成為該疾病患者有用的治療和介入工具。盡管干細(xì)胞外泌體和干細(xì)胞的研究方向仍需探索，但通過研究人員和醫(yī)療專業(yè)人員的不懈努力，這些技術(shù)有一天可能會成為有用的輔助工具和重大的醫(yī)學(xué)進(jìn)步，改善多囊卵巢綜合癥女性的健康。

參考資料：Hadidi M, Karimabadi K, Ghanbari E, Rezakhani L and Khazaei M (2023) Stem cells and exosomes: as biological agents in the diagnosis and treatment of polycystic ovary syndrome (PCOS). Front. Endocrinol. 14:1269266. doi: 10.3389/fendo.2023.1269266

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